Тест RapidVet-H Feline для котів для визначення групи крові

Опис

Як показує практика, в останні роки в ветеринарній трансфузійній медицині значення визначення груп крові в котів і собак неабияк виросло.

Зокрема, попит на визначення групи крові є на підйомі, тому що тільки визначаючи групу крові реципієнта можна уникнути смертельної помилки під час переливання крові. У кішок трапляються три групи крові, зазначені як А, В і AB. Антигени кішок не мають жодного відношення до антигенів людини АВО та визначаються котячою алоімунною сироваткою. Групи крові варіюються між породами. У кішок одна система груп крові, що складається з двох антигенів, комбіновано або окремо: А, В і AB. Групи крові в кішок народжуються аутосомно за простими ознаками з домінуванням групи А над групою В. Більшість кішок мають антиген А і майже одну третину з них, що трапляються в природі, мають анти-В антитіла. Група У всіх кішок, що трапляються в природі, є високий титр анти-А антитіл. Недавній опитування, проведений у Сполучених Штатах, показав, що відсоток кішок з антигеном В варіюється від 0,3% до 59% залежно від породи.

Кішки з групою крові АВ рідкісні, оскільки такі кішки на мембранах еритроцитів мають обидва антигени: А і В, вони не мають або мають тільки антиА, або тільки анти-В антитіла. Визначення груп крові в кішок відіграє важливу роль у практичній ветеринарній медицині для запобігання змішуванню А і В еритроцитів. Кішки з B еритроцитами демонструють негайну та катастрофичну системну анафілактичну реакцію (гіпотензія, брадалікардія,ада, сечовипускання, дефекація, блювота та важка неврологічна депресія), а також гемолітичні ознаки (гемолбінемія і гемоглобінура); титра анти-А антитіла. Кішки з А еритроцитами та природними антитілами з низьким титром анти-B антитіл матимуть слабку реакцію, під час змішування з B кров'ю, але навіть це може вплинути на швидкість відновлення організму в разі медичного випадку, оскільки еритроцити, що переливаються, мають короткий термін. життя. Інші кішки з еритроцитами А, яким кров групи B переливається вперше, реакцію не виявляють, але, як наслідок, у них розвиватиметься помірний титр анти-B антитіл, який призведе до серйозної негативної реакції в разі подальшого несумісного переливу. Визначення групи крові в кішок також має важливе значення під час схрещування, що дає розуміння можливих проблем у кошенят. Неонатальний гемоліз може статися, коли є несумісність групи крові матері та плода. У порід часто трапляється в природі кішок із групою В і високим титром анти-А антитіл, неонатальний гемоліз може статися в кошенят із групою крові А внаслідок схрещування самки з групою крові В і самцем з групою А. Материнські анти-А антитіла з молозивом поглинаються кошеням і активно руйнують його еритроцити. І здорові під час народження кошенята гинуть у перші дні життя. Визначення груп крові в кішки та кота, а також добір сумісності можуть виключити гемоліз новонароджених кошенят.

RapidVet-H (Feline) призначений для визначення кішок групи крові А, групи B і групи АВ. Антисироватка ліофілізована на тестових картках, добре розводиться й поєднується з цілісною кров'ю пацієнта. Усі групи А етроцитів реагують зі специфічною антисировачкою і викликають реакцію аглютинації; група В еритроцитів проявляється зі своєю специфічною антисировачкою; всі групи АВ еритроцитів викликають аглютинацію у всіх випадках. Характер аглютинації в тестовому полі «А» і в тестовому полі «В» неабияк відрізняються одна від одної через використовувану різну природу антисироватки.

Принцип проведення аналізу

RapidVet-H (Feline) аналіз ґрунтується на реакції аглютинації, яка відбувається тоді, коли еритроцити, що містяться на поверхні мембрани одну з груп A, B або AB антигенів взаємодіють із висушеною антисировачкою специфічного антигену, нанесеного на тестове поле карти.

Тип A еритроцитів вражає NeuGc2GD3, що утворює гліколіпідний антиген на поверхні мембрани. RapidVet-H (Feline) використовує мийні моноклональні антитіла, що доводять специфіку цього антигену, ліофілізованого на тестовій мапі. Молекула антитіла дає йому здатність до зв'язування і склеювання антигенів, специфічних для крові групи А.

Тип еритроцитів характерний для NeuAc2GD3 і має вигляд нейрамінової кислоти, представленої гангліозидами та браком NeuGc, який є в групі А еритроцитів. Специфічний зв'язувальний ланок був виявлений летин Triticum Vulgaris. RapidVet-H (Feline) використовує лектин Triticum Vulgris для виявлення групи крові.

Увага:   певну кількість котячих пацієнтів демонструє автоаглютинацію різного ступеня, зумовлену різними чинниками, що викликають аглютинацію зі власними червоними тілами. Якщо пацієнт демонструє автоаглютинацію під час тесту, визначити групу крові неможливо без сепарування сироватки та промивання еритроцитів перед тестом. Червоні кров'яні тільця промиваються центрифугуванням на швидкості 2000 обертів/хв упродовж 5 хвилин. Після центрифугування отримують рідку частину (плазму) у верхній і тверду частину (еритроцити) у нижній. Оператор має зібрати рідку частину та замінити його таким самим об'ємом фізрозчину. Потім оператор має знову перевірити зразок, чи з'явиться ще реакція автоаглютинації. Якщо це так, то він має знову повторити процедуру промивання.

Реагенти та матеріали:

Тестова карта аглютинації  . Кожна карта має 3 тестові поля. Карта містить "Auto-Agglutination Saline Screen" і два поля "Patient Test" — група A і "Patient Test" група В. Усі карти упаковані індивідуально та упаковані в поліетиленові пакети, що містять вологопоглинач. Зберігати за кімнатної температури або в холодильнику (+2+8 °C).

Пляшечка з розріджувачем  . Прозорий пластиковий флакон містить 0,02 моль/дм3 фосфатний буферний розчин (PBS) з pH 7,4. Наконечник пропускає по 50 мкл в одній краплі. Зберігати за кімнатної температури або в холодильнику (+2+8 °C).

Піпетки та заважки  . Кожен поліетиленовий пакет містить пластикові піпетки та заважки.

Зберігання та стабільність:

1. Тестова карта аглютинації залишається стабільною за кімнатної температури (+20+25 °C) упродовж 18 місяців із дати виробництва. Кожна карта має дату терміну придатності. Зберігання в холодильнику (+2+8 °C) не продовжує істотно, але й несприятливий вплив на якість аналізу не робить. Але може виключити непередбачені або невідомі коливання кімнатної температури за межі допустимого діапазону.
2. Розріджувач стабільний упродовж 24 місяців із дати виготовлення. Кожна пляшечка маркована датою закінчення терміну придатності.
3. Якщо тест проводиться правильно, хоча в одному тестовому полі з написом Patient Test пройде реакція аглютинації. Отже, тест пройшов самоконтроль.

Примітка:   на кожному тестовому RapidVet-H (Feline) вказана дата закінчення терміну придатності, у якому враховується раннє закінчення терміну придатності компонента в наборі. Навіть якщо деякі компоненти мають пізніші дати, закінчуючи індивідуального терміну придатності, їх використання з компонентами інших наборів не рекомендується.

Процедура проведення тесту:

1. Наберіть мінімум 0,4 мл крові пацієнта в шприц або піпетку з/або ЕДТА як антикоагулянт. Аналіз потребує 150 мкл крові.
2. Напишіть на мапі ім'я/номір кішки та дату проведення тіста.
3. Покладіть тестову карту на плоску поверхню.
4. Нанесіть 1 краплю розчинника (50 мкл) з пляшечки з дозатором у зону Auto-Agglutination Saline Screen.
5. Наберіть невелику кількість зразка крові в піпетку та нанесіть 1 краплю (50 мкл) у зону Auto-Agglutination Saline Screen. Використовуйте заважавку для змішування матеріалів по всій поверхні тестового поля впродовж 10 секунд. Мішалку тримайте постійно притиснутою до поверхні тестової карти (див. інструкцію з користування піпеткою).
6. Є невеликий відсоток кішок, що мають автоаглютинацію. Якщо спостерігається аглютинація, припиніть проведення тіста і перш ніж продовжити, зробіть процедуру промивання червоних кров'яних тілець.
7. Нанесіть із пляшечки з дозатором у кожне тестове поле, що залишився, 1 краплю розріджувача (50 мкг). Розріджувач допомагає в реконструкції ліофілізованого матеріалу.
8. Акуратно збовтайте пробірку зі зразком крові пацієнта, щоб вся внутрішня її поверхня покрилася кров'ю для розчинення антигенів на стінках.
9. Наберіть невелику кількість зразка крові пацієнта в піпетку та нанесіть по 1 краплі (50 мкг) у кожне з 2 тестових полів із написом Patient Test. Використовуйте заважавку для змішування матеріалів із вмістом кожного поля впродовж 10 секунд. Утримуйте заважавку постійно притиснутою до поверхні тестового поля. Для кожного тестового поля використовуйте окрему заважавку.
10. Додайте другу краплю розріджувача до тестового поля "Type A". Повторно не перемішуйте.
11. Покачайте тестову карту вздовж осі впродовж 2 хвилин, переконайтеся, що матеріал "обертається" кожен у своєму полі. Будьте обережні, не змішайте зразки між собою.
12. Нахиліть картку під кутом 10-20°, щоб надлишок у крові втік у нижню частину тестового поля. Залишаного матеріалу у верхній частині тестового поля буде досить для оцінювання результату.
13. Порахуйте результат, зверніть увагу на поля, де відбулася аглютинація.
14. Після того, як матеріали на мапі висохли, наклейте на карту плівку для збереження результату.

Примітка

Використання піпетки: утримуйте піпетку між великим і вказівним пальцями біля закритого плоского кінця, стисніть і не відпускайте. Утримуйте вертикально піпетку та помістіть відкритий кінець піпетки нижче поверхні зразка. Розтисніть піпетку для втягування зразка. Потім утримуйте піпетку в перпендикулярному положенні безпосередньо над тестовим полем, на який має бути нанесений зразок крові. Просто стисніть і нанесіть краплю на тестове поле (50 мкг). Для компенсації втрати матеріалу, що залишається на заважці, кожна піпетка має не більш ніж 50 мкг. Для кожного зразка використовуйте нову піпетку. У будь-якому разі піпетка не має бути використана більш ніж один раз, інакше може статися змішування матеріалів тестових полів і результати тесту будуть недостовірними.

Результати

• Якщо аналіз пройшов правильно, має бути видно аглютинацію хоча б одного з тестових полів із позначкою "Patient Test".
• Якщо аглютинація добре видно в тестовому полі для групи А, то тестована кров має групу А.
• Якщо аглютинація добре видно в тестовому полі для групи B, то тестована кров має групу В.
• Якщо аглютинація добре видно в обох тестових полях, то кров, що тестується, має групу АВ.
• Треба враховувати, що за будь-якого тесту реакція аглютинації буде видно за 2 хвилини.
• Характер аглютинації в тестовому полі B відрізняється від реакції в полі А.
• Аглютинація в тестовому полі А зазвичай містить невелику кількість великих кульок.
• Аглютинація в тестовому полі зазвичай у формі невеликих дискретних скупчень, кожен як головка шпильки.
• Якщо пацієнт анемічний і якщо пацієнт має групу крові А, то антиген може стати насиченим антитілами та перешкоджати перехресному зв'язуванню й аглютинації.
• Якщо пацієнт має низький гематокрит (НСТ), це може допомогти в проведенні тіста, проводячи його без використання розріджувача в тестових полях (A і B).

Межі

1. Для отримання точних результатів важливо чітко дотримуватися інструкцій.

2. Завжди використовуйте нову піпетку для кожного зразка та нову заважавку для кожного тестового поля. Повторне використання будь-якого пристрою викликає контамінацію та неточні результати.

3. Стабільність окремих компонентів набору змінюється. Тримайте компоненти, як зазначено на етикетках. Не використовуйте компонент із закінченням терміну придатності. Використання прострочених матеріалів може призвести до недостовірних результатів.

4. Розріджувач представлений у пляшці з кришкою, що загвинчується, щоб мінімізувати ненавмисне бактеріальне або інше забруднення. Розріджувач не має використовуватися ні для чого, крім проведення тіста на визначення групи крові.

5. Фізична цілісність зразка пацієнта має вирішальне значення для коректності результату.

6. Завжди набирайте повний шприц або пробірку, де використовується ЕДТА. Найменша кількість крові викличе занадто високу концентрацію ЕДТА в тестовній пробі.